Біологічні методи боротьби з вірусами рослин
Проблемним місцем в агротехнологіях вирощування кукурудзи є система захисту від шкідливих організмів, зокрема бур’янів. Це викликано низькою здатністю кукурудзи до їхнього пригнічення через винятково сприятливі умови (достатня площа живлення і добре освітлення протягом тривалого часу) для росту бур’янової рослинності.
Життєвий цикл вірусів рослин як облігатних внутрішньоклітинних паразитів повністю залежить від метаболізму своїх рослин-хазяїв. Наразі не існує ефективних терапевтичних засобів боротьби з вірусними захворюваннями, а основними засобами контролю в сільському господарстві є застосування профілактичних засобів. Це впровадження сортів з підвищеною природною резистентністю до патогенів, боротьба з переносниками та санітарна обробка уражених полів з видаленням хворих рослин (рис.1).
Найбільш ефективними, економічно-вигідними і екологічними заходами контролю вірусних інфекцій є використання сортів рослин з генетичною стійкістю до збудників. Останнім часом ця стратегія широко використовується в програмах підвищення врожайності культур — crop improvement programs. Вірусостійкі сорти отримують як методами класичної селекції, так і за допомогою генетичних маніпуляцій — відносно швидкого способу введення в рослини потрібних генів стійкості, що може бути особливо корисним в боротьбі з вірусними захворюваннями, які з’являються раптово. Труднощі, що виникають при створенні стійких рослин генно-інженерними методами, зазвичай обумовлені обмеженою кількістю доступних «традиційних» генетичних джерел стійкості та високою швидкістю мутації вірусних геномів, що призводить до нетривалої стійкості в польових умовах. Наразі створені та успішно культивуються рослини з трансгенною стійкістю проти вірусів рослин на основі домінантних генів стійкості — сорти томатів, стійкі до Tomato spotted wilt virus (TSWV), Tomato mosaic virus (ToMV), Tomato chlorotic spot virus (TCSV), Groundnut ringspot virus (GRSV) та Impatiens necrotic spot virus (INSV), сорти квасолі, стійкі до Bean common mosaic virus (BCMV) і ряду інших вірусів. Ген структурного білка оболонки (БО) вірусу тютюнової мозаїки (ВТМ) — один із перших вірусних генів, перенесених в рослини тютюну. Наразі трансгенна стійкість на основі гена БО відома для більше ніж 35 вірусів із 15 різних таксономічних груп, зокрема tobamo-, potex-, cucumo-, tobra-, carla-, poty-, luteo- і alfamo- вірусів.
Найбільш консервативним механізмом захисту клітинних РНК від чужорідної інформації у вигляді нуклеїнових кислот вірусів, транспозонів чи трансгенів вважають РНК-замовчування. В основі механізму РНК-замовчування лежить розпізнавання клітинними білками (фермент Dicer) дволанцюгової РНК екзогенного або ендогенного походження та нарізання її на короткі (21–26 нуклеотиди) фрагменти, відомі як короткі інтерферуючі РНК і мікроРНК. Більшість досліджень генно-інженерної стійкості на основі РНК-замовчування були проведені на моделі одноланцюгових +РНК вірусів. Однак застосування подібних вірусних трансгенів було ефективним і щодо інших вірусів, зокрема, тосповірусів, вірусів з «?» РНК-геномом або гемінівірусів з одноланцюговим ДНК-геномом. Ця стратегія була успішно застосована для створення трансгенних рослин, стійких до Pepper mild mottle virus (PMMoV) і Plum pox virus (PPV).
Саме механізм РНК-замовчування було покладено в основу створення нового біологічного препарату «BioClay», в якому вчені вдало поєднали РНК з наночастинками глини: така суміш при обприскуванні надійно прилипає до листків і довгий час не змивається. В «BioClay» позитивно заряджені частинки глини зв’язують і захищають від руйнування негативно заряджені молекули РНК. Мікроскопічні частинки глини поступово руйнуються, повільно вивільняючи РНК, і, таким чином, однократне розпилення препарату забезпечує тривалий (принаймні на 20 днів) захист від вірусів рослин. Результати своїх досліджень австралійські дослідники опублікували в науковій праці «Clay nanosheets for topical delivery of RNAi for sustained protection against plant viruses» (Nature Plants, № 3, 2017 р.). Основною перешкодою при створенні біопрепарату в комерційних об’ємах є досить висока собівартість отримання РНК, проте, найближчим часом, як запевнив John Killmer — власник біотехнологічної компанії Apse, будуть застосовуватись технології, які значно здешевлять цей процес і дозволять виробляти РНК собівартістю менш ніж 2 дол. за грам. Безперечною перевагою даного препарату є його екологічна безпечність, він не затримується в ґрунті і не забруднює воду. «BioClay» з часом деградує, зменшуючи ризик для навколишнього середовища і здоров’я людини.
Генетична інженерія відкриває нові можливості для підвищення стійкості рослин до патогенів та комах-шкідників. Кількість трансгенів, що використовуються для трансформації рослин, постійно зростає. Альтернативним підходом підвищення стійкості сільськогосподарських культур є використання захисних потенціалів самих рослин. Цього можна досягнути як підвищенням рівня експресії власних генів стійкості, так і перенесенням генів, що кодують білки і пептиди з антивірусними властивостями з інших видів рослин. Таким чином, традиційні методи селекції сільськогосподарських культур, стійких до різних патогенів, доповнилися генно-інженерними підходами. Ці підходи відрізняються за своєю ефективністю, і їхня кількість постійно зростає.
Як вже зазначалось вище, не існує хімічних чи біологічних препаратів, які можна було б застосовувати з терапевтичною метою, тобто, для «лікування» рослини. Проте, використання деяких хімічних чи біологічних препаратів з профілактичною метою може індукувати в рослинах різноманітні механізми захисту (резистентності) до широкого спектру як вірусних, так і грибних та бактеріальних патогенів. Наразі відомі рослинні гормони, екзогенне застосування яких «запускає» ефективні механізми системної стійкості щодо вірусних і не вірусних збудників. Найбезпечнішим серед аналогів рослинного гормону саліцилової кислоти було визнано бензотіадіазол (benzothiadiazole).
Цей досить ефективний індуктор стійкості до багатьох патогенних мікроорганізмів, включаючи віруси, на ринку засобів захисту рослин відомий під загальною назвою ацибензолар-S-метил (acibenzolar-S-methyl) та торгівельними марками «Actigard», «Bion 50WG», «Blockade», «Boost». Препарат не діє безпосередньо на віруси, позаяк активує природні захисні механізми рослин. Звичайно, ефективність дії ацибензолар-S-метилу, як і інших індукторів системної стійкості, залежить від багатьох чинників: дози, виду і сорту рослини, стадії розвитку, кліматичних умов і строку застосування, проте, застосування препарату в поєднанні з методами селекції та генетичної інженерії є надзвичайно ефективним у збільшенні стійкості рослин до збудників вірусної природи.
Застосування біопрепаратів, особливо в передпосівний період, може бути одним з ефективних, екологічно безпечних прийомів зниження шкодочинності вірусних інфекцій. При створенні біологічних препаратів в їхню основу покладено корисні для захисту рослин мікроорганізми або продукти їхньої життєдіяльності. Препарати натурального походження сприяють покращенню функціональних показників хворих рослин за рахунок збільшення площі асиміляційної поверхні як коріння, так і надземної маси (що впливає на засвоєння поживних речовин), інтенсифікації процесів фотосинтезу у рослин.
У зернобобових культур, важливою функцією забезпечення життєдіяльності яких є симбіотрофне азотне живлення, фізіологічний стан рослин покращується шляхом активізації симбіотичної азотфіксації (збільшується азотне живлення). Окрім того, біопрепарати можуть містити фітогормональні речовини, які, за характером впливу на рослини, належать до біогенних еліситорів, і їхня антивірусна активність обумовлена підсиленням експресії захисних генів, синтезом стресових білків і фітоалексинів та індукуванням системної резистентності до патогенів чи несприятливих умов.
За передпосівної обробки насіння мікробними препаратами українського виробництва («Ековітал», «Хетомік», «Ризобофіт», «Ризогумін» та «Гаупсин») спостерігається значне зниження концентрації вірусу в рослинах, сповільнення розвитку вірус-індукованих симптомів, зменшення негативного впливу вірусної інфекції та, як наслідок, — покращення багатьох фізіологічних показників культури. Результати наукових досліджень антивірусної активності даних препаратів свідчать про їхній позитивний вплив на перебіг вірусної інфекції, показники урожайності та якість отриманої продукції.
У світовій практиці широко використовують біологічні препарати, що стимулюють ріст ризобактерій рослин та пригнічують розвиток бактеріальної і вірусної інфекції. Так, на основі ендофітного штаму Bacillus pumilus INR7 було створено біологічний фунгіцид з комерційною назвою «Yield Shield». Препарат є природним потужним засобом захисту бобових (переважно сої) щодо ряду вірусів та бактерій. Основним механізмом дії даного препарату є розвиток системної індукованої стійкості в рослинах, а оскільки він містить колонізуючі бактерії, то обробка насіння біофунгіцидом сприяє утворенню активної кореневої системи і покращенню фізіологічних показників рослини та зростанню врожаю. Інший комерційний бактеріальний біопрепарат «BioYield» на основі B. subtilis GB03 та B. amyloliquefaciens значно підвищує продуктивність сої та кукурудзи, а також позитивно вливає на експресію генів стійкості та індукує розвиток резистентності до вірусних чи бактеріальних захворювань.
Одним із заходів боротьби з вірусними інфекціями є зниження чисельності їхніх природних векторів. До переносників вірусів, які викликають захворювання найбільш економічно-важливих культур, належать кліщі, попелиці, цикадки, білокрилки та ґрунтові гриби. Так, кліщі роду Aceria (A. tulipae, A. tosichella Keifer) є основними векторами вірусів Wheat streak mosaic та Wheat spot mosaic, що досить поширені в Україні. За допомогою переносників віруси з хворих рослин розселюються на ярі колосові, кукурудзу, багаторічні злакові трави, злакові бур’яни, пізніше — на падалицю злаків, де розмножуються. Осередки масового розмноження кліщів на озимій пшениці доцільно обприскувати препаратами з акарицидною дією (дієвими саме проти кліщів) для локалізації поширення шкідника і запобігання ураженню рослин вірусом смугастої мозаїки пшениці. До акарицидів біологічного походження належать препарати на основі авермектинів — порівняно нового класу макроциклічних лактонів, які є продуктами біологічного синтезу. У природних та виробничих умовах вони синтезуються ґрунтовим мікроорганізмом Streptomyces avermitilis. Механізм дії речовин цього класу (абамектину та емамектину) на комах полягає у блокуванні передачі нервового імпульсу, що призводить до необоротного паралічу та загибелі шкідників. Торгівельні назви таких препаратів — «Abba», «Abathor», «Affirm», «Agri-Mek», «Avid», «Dynamec», «Vertimec», «Zephyr». Ці засоби застосовуються шляхом обприскування листя до появи або відразу після появи шкідників. Оскільки абамектин має трансламінарні властивості, при обприскуванні досить швидко проникає в листя. В рослині препарат стимулює виділення гамма-аміномасляної кислоти, яка у кліщів викликає нервово-паралітичну дію. Препарати на основі авермектину добре переносяться рослинами, не знищують корисних комах, малорухомі в ґрунті й швидко розкладаються мікроорганізмами.
До найважливіших представників попелиць, які є переносниками фіто вірусів, відносять Macrosiphum (Sitobion) avenae (велика злакова), Rhopalosiphum padi (черемхова), Rhopalosiphum maidis (кукурудзяна), Schizaphis graminum (звичайна злакова), Myzus persicae (зелена персикова), Macrosiphum euphorbiae (велика картопляна) та ін. Віруси найбільш економічно-важливих для України культур переносяться саме попелицями (віруси: карликової мозаїки кукурудзи (Maize dwarf mosaic virus), жовтої карликовості ячменю (Barley yellow dwarf virus), зморшкуватої мозаїки квасолі (Bean wrinkle mosaiс virus), жовтої мозаїки квасолі (Bean yellow mosaic virus), мозаїки сої (Soybean mosaic virus) тощо).
Основою біопрепаратів, запропонованих для біологічного контролю попелиці, є ентомопатогенні гриби відділів Deuteromycota і Zygomycota. На основі природних штамів цих грибів були розроблені біопрепарати «Боверин» (на основі гриба Beauveria Bassiana Bals. Vuil.), «Вертицилін» (на основі Verticillium lecanii Nees), «Піриформін» (на основі Entomophthora piriformis (Petch) Hall et Bell) та ін. Ще на початку 1980-х років було розроблено біопрепарат мікоафідин, що представляє собою 1–2%-ну суспензію спор і конідій цих грибів Entomophthora thaxteriana. Мікоафідин ефективний у боротьбі з різними видами попелиць і практично не токсичний для ентомофагів та для теплокровних тварин. Найбільш чутливими до мікоафідину в лабораторних і польових умовах виявились баштанна, бавовняна, зелена яблунева і злакові попелиці (відсоток загиблих комах становив 80–100%). Потрапляючи на поверхню тіла кліщів, конідії і спори гриба проростають, грибниця проникає в тканини. Після загибелі хазяїна на поверхні його тіла з’являється наліт, утворений конідієносцями з конідіями, які в умовах вологості (близькій до абсолютної) розсіюються на значні відстані і проростають. За несприятливих умов в тілі загиблих кліщів формуються спори з подвійною оболонкою, здатні зберігатися в ґрунті і на рослинних рештках впродовж багатьох років. Препарат «Вертицилін» рекомендований для боротьби з білокрилками, тютюновим трипсом, попелицями та іншими комахами.
«Пециломіцін» — це новий біотехнологічний препарат для боротьби з ґрунтовими шкідниками (нематодами, капустянками, дротяниками). Активну діючу основу препарату складають спори ентомопатогенного гриба Paecilomyces fumosoroseus (Wize) Brown et Smith. Ураження комах грибом пов’язано з проникненням гіф гриба через покриви тіла шкідника. Спори гриба проростають, ростова трубка проникає в тіло комахи. Клітини гриба розмножуються і поширюються по гемолімфі, заповнюючи всю порожнину тіла. Хвора комаха втрачає активність і апетит. Після загибелі тіло комахи стає жорстким і муміфікованим, заповнюючись міцелієм гриба. Спори, які формуються, є джерелом вторинної інфекції в популяції шкідника. «Пециломіцін» екологічно безпечний та має високу біологічну активність, не фітотоксичний і не шкідливий для тварин та корисних комах, не накопичується в продукції та навколишньому середовищі, продукція може використовуватися в дієтичному та дитячому харчуванні.
Хоча головною перевагою біопрепаратів є високий ступінь екологічної безпеки, на відміну від хімічних пестицидів, їхня ефективність значно залежить від температури, вологості, інсоляції. Досить часто пестициди є відносно дешевшими, довше зберігаються на насінні і більш ефективно захищають його при різних погодних умовах. Однак в сільському господарстві часто виникають ситуації, коли використання біопрепаратів є більш доцільним і вигідним. Так, біопрепаратами замінюють фунгіциди з низькою ефективністю, до яких у патогенів виникла резистентність; їх використовують замість небезпечних для навколишнього середовища хімічних пестицидів; без біологічного захисту неможливе ведення біологічного (органічного) сільського господарства.
Іншим типом біопрепаратів з інсектицидною дією є так звані «зелені» інсектициди («green»-insecticides) — препарати на основі рослинних екстрактів. Такими інсектицидами є препарати на основі діючої речовини матрину (компонента, що міститься в коренях софори). Діюча речовина препарату — глікозид матрин, який ефективно діє проти широкого спектра шкідників. В Україні інсектициди на основі матрину представлені препаратами «Біорейд» та «Натур Гард». Вони починають діяти відразу після внесення, мають чітко виражену контактно-кишкову дію — викликають параліч нервової системи і загибель комах-шкідників. Крім загальних переваг, властивих всім біопрепаратам, «Біорейд» та «Натур Гард» працюють в широкому діапазоні температур і залишаються ефективними навіть при значних температурних коливаннях.
Іншим прикладом подібних речовин є азадирахтин. Так, екстракти з насіння індійського бузку — азадирахти індійської (Azadirachta indica) мають досить високу інсектицидну активність. Ця активність, як правило, обумовлена наявністю азадирахтина, який є вторинним метаболітом і відноситься до класу натуральних продуктів із загальною назвою «Лімоноїди». Дослідження останніх 20 років показали, що азадирахтин є досить потужним регулятором розмноження, росту і живлення. Він знижує або повністю припиняє здатність харчуватися у багатьох шкідників, в тому числі нематод. Завдяки подібності до гормонів комахи, азадирахтин проникає в організм і починає повністю контролювати гормональну систему, зокрема, впливає на ріст і розвиток комах, порушує ендокринну систему, зупиняє трансформацію личинки в лялечку.
Піретрум отримують із суцвіть далматської ромашки. З хімічної точки зору, препарат являє собою суміш із шести ефірів хризантемової кислоти, основним компонентом якого є піретрин І. Піретрум — це контактна отрута, потрапляє в тіло комахи через дихальні отвори. Синтетичні піретроїди є одним з найбільш доступних інсектицидів і застосовується проти багатьох шкідників. Наразі існує дуже мало інсектицидів для обробки насіння, що не містять активних речовин цієї групи («Бульдок», «Децис», «Фастак», «Фьюрі», «Требон»).
До біологічних засобів боротьби відносяться і феромонові пастки — екологічно чистий і безпечний для природи спосіб контролю (моніторингу) комах-шкідників і боротьби з ними з уже більш ніж тридцятирічною історією, що заслужив широке визнання у всьому світі. Феромони — біологічно активні речовини, які виділяються комахами для залучення особин свого виду. У феромонових пастках приманкою для комах-шкідників слугують синтезовані в лабораторії феромони, що дозволяє надійно захистити готову продукцію комах, допомагає скоротити витрати на боротьбу з комахами-шкідниками та скорочує кількість хімічних обробок на 50–70%, тим самим запобігаючи забрудненню навколишнього середовища і врожаю.
Висновок
Таким чином, основними методами біологічного контролю вірусних захворювань рослин застосування комплексу профілактичних агротехнічних засобів є: боротьба із резерваторами вірусу — бур’янами і самосійними рослинами (альтернативними хазяїнами вірусів чи їхніх векторів) на полях і прилеглих територіях; дотримання рекомендованих для певної території термінів висівання культури; постійний моніторинг і санітарне видалення рослин з симптомами вірусного захворювання; використання безвірусного насінного матеріалу; боротьба з переносниками шляхом біоінсектицидних обробок насіння та рослин впродовж вегетації; застосування біологічних препаратів для індукування в рослинах механізмів неспецифічної резистентності до патогенів; застосування комплексних мікробних препаратів, що мають різнобічний вплив на розвиток і функціонування сільськогосподарських культур; створення та впровадження стійких (або толерантних) до вірусів сортів.
А. Кириченко, Інститут мікробіології і вірусології ім. Д.К. Заболотного НАН України
Інформація для цитування
Біологічні методи боротьби з вірусами рослин/ А. Кириченко// Спецвипуск ж. Пропозиція. Біозахист та біопрепарати - актуальна перспектива/ — 2017. — С.- 42-46